大鼠皮質醇（Cortisol）ELISA檢測試劑盒的操作流程是怎樣的？

 

　　一、原理

　　ELISA，全稱酶聯免疫吸附測定法，是一種通過酶作用進行信號放大的免疫學檢測方法。大鼠皮質醇（Cortisol）ELISA檢測試劑盒采用雙抗體夾心法。在這個過程中，特異性的抗體被固定在微孔板上，形成免疫復合物。樣品中的皮質醇分子與該抗體特異性結合。然后，添加另一個與皮質醇結合的辣根過氧化物酶標記二抗，形成一個三明治結構，即：抗體-抗原-抗體-標記二抗。

　　接下來，加入底物，底物與辣根過氧化物酶反應產生發光信號。發光信號的強度與樣品中皮質醇的濃度成正比。通過比較樣品與標準曲線之間的光學密度差異，可以推算出樣品中皮質醇的含量。

 

　　二、操作流程

　　大鼠皮質醇（Cortisol）ELISA檢測試劑盒的操作流程如下：

　　1.樣品預處理：將血液樣本離心，收集上清液，加入試劑盒提供的稀釋緩沖液稀釋后，待用。

 

　　2.加樣：取出微孔板中的孔板條，分別加入樣品、標準品和陰性對照液，同時留一些空白對照孔。

 

　　3.孵育：在37℃恒溫箱中進行孵育，使復合物形成。

 

　　4.洗板：使用洗板緩沖液將微孔板洗滌干凈，去除未結合的蛋白質等雜質。

 

　　5.加標記二抗：加入辣根過氧化物酶標記的二抗，孵育。注意，標記二抗必須特異性地結合在皮質醇抗體-抗原復合物的另一側。

 

　　6.再次洗板：使用洗板緩沖液洗滌孔板。

 

　　7.加底物：加入底物，孵育。

 

　　8.終止反應：加入終止液，使酶反應停止。

 

　　9.讀板：將微孔板放入檢測儀中測量吸光度（OD）值。